[求救] gelatin zymography的處理法

看板Biotech作者 (在雲朵上失足 )時間18年前 (2008/03/24 16:26), 編輯推噓4(4推 0噓 7→)
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想請問各位 有沒有人做過這個實驗 由於老師叫我試做　做了幾次 發覺sample的處理遇到問題 查了paper說是要用condition medium(即serum free)收取 意思是指收上青液 還是底盤的細胞也要依並收下呢 那底盤的細胞 是利用ripa buffer還是其他呢? 就再這個點一值卡關 跑了兩次膠 都沒有出現ＣＬＥＡＲ　ＢＡＮＤ 想請問問題為何？ 謝謝阿 -- ｏ　　 ｏ》　 ｏ　　 ｏ　 ｏ　 《ｏ ｏ ꈠ |┼┘　＜∕　　＜｜＞　〈Ｔ〉 ＜｜＞ ﹨＞ └┼┘ ＜＼　　／＞　 〈 〉　 ∕﹨ 〈 〉 ＜＼ ／＞ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.122.194.181
推
03/24 16:33, , 1F
不收細胞只收medium跑PAGE?看哪邊的蛋白質啊？
03/24 16:33, 1F
推
03/24 16:41, , 2F
我沒有用serum free的medium也跑得出clear band耶
03/24 16:41, 2F
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03/24 16:41, , 3F
所以我想請問底盤細胞應該如何處理？
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不收細胞 只收medium
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推
03/24 21:59, , 5F
取適量不還DTT BME的LOADING DYE混合MEDIUM電泳
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推
03/25 07:40, , 6F
10%FBS/RPMIonly也可以跑的出band
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我想你的問題應該是con不夠 我之前懸浮細胞2x10^6/ml養ꐠ
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24小時後load 30 ul 上青液, MMP是release protein
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03/25 07:42, , 9F
記得要有positive control證明你的zymogrphy work喔
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我用的serum free medium是stemline 沒有background
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03/25 10:20, , 11F
謝謝各位阿 我這週會再試做一次
03/25 10:20, 11F
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