[求救] cloning遇到問題！

看板Biotech作者 (小黑豬)時間18年前 (2008/03/15 00:19), 編輯推噓3(3推 0噓 8→)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/1
為了clone一個大約1.6K的gene，設計primer進行PCR想把full length片段給P出來，結果不管怎麼P都沒有任何band。因為是full length，也沒有辦法把primer換個地方設計，請問大大們，有沒有一些建議？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.123.138.160
推
03/15 00:30, , 1F
我最近也是遇到這種問題, 早知原因是不同物種, 所以p不出
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03/15 00:32, , 2F
如果物種是對的, 試著降低anneal溫度, P看看..
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03/15 07:48, , 3F
我想你應該去查一下序列正確性問題..1.6k不算太大
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03/15 07:49, , 4F
一般的PCR大多都做的出來..要是primer沒錯
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03/15 07:50, , 5F
就試試看做gradient的溫度去找條件吧
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推
03/15 10:32, , 6F
你可以試試看菌是不是出問題了~所以轉型效果變差!
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03/15 10:33, , 7F
我們實驗室最近有一批菌因為冰箱關係..導致長的出菌~卻沒接
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03/15 10:34, , 8F
到任何東西~~~
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03/15 15:04, , 9F
物種是人類沒錯，溫度已降到五十五度，但仍沒有任何band
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推
03/15 19:33, , 10F
試試換cDNA library 基因不見得有表現
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03/15 19:54, , 11F
用了很貴的taq，溫度降到五十度，終於跑出來了，謝謝！
03/15 19:54, 11F
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