[求救]想請教大家一個令我不解的現象..

看板Biotech作者 (紅豆)時間16年前 (2008/03/13 15:43), 編輯推噓6(6推 0噓 7→)
留言13則, 6人參與, 最新討論串1/1
大家應該對使用BCA kit去與含有細胞蛋白質的 lysis buffer中反應 最後由ELISA測定OD值....在定量出蛋白質的量 如果我敘述沒錯的話流程大概是這樣吧^^ 而再96well中注入BCA kit 和 含有蛋白質buffer的同時 大家應該都會多注入要當做blank的BCA kit 和 不含蛋白質的lysis buffer 以作為將來要扣掉的標準 但問題來了... 在我使用lysis buffer萃取細胞蛋白質後... 依然按照上述步驟, 空白也加了,預測物也加了, BCA kit也加了 反應一段時間後...用ELISA測OD值....發現扣掉空白後是負值...> < 怎麼想都沒道理... 就算都沒沒萃取到蛋白質.....頂多是0吧....怎麼會是負的勒.... 真的不解...到底哪裡錯了.......拜託各位幫我解惑.... 非常謝謝你看到最後一行.....非常謝謝囉^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.118.6.103
推
03/13 16:13, , 1F
用ELISA的話 沒有蛋白未必是0 有可能是負值的
03/13 16:13, 1F
→
03/13 16:18, , 2F
那怎麼處理這種數據阿...沒有意義了嗎.> <"
03/13 16:18, 2F
推
03/13 17:05, , 3F
因為你的buffer和BCA會起作用…
03/13 17:05, 3F
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03/13 17:06, , 4F
改用超音波或用破菌機，不加lysis buffer看看吧
03/13 17:06, 4F
推
03/13 18:58, , 5F
沒抽到蛋白質應該是個大問題 注意protocol跟試劑吧
03/13 18:58, 5F
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03/13 19:03, , 6F
其實在細胞數目約20萬以上才測的到ㄟ.在少的話就變成負的
03/13 19:03, 6F
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03/13 19:05, , 7F
步是完全抽不到
03/13 19:05, 7F
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03/13 21:58, , 8F
我buffer的成分是tris-HCL50mM,tritonX-100 1%,EDTA 0.5mM
03/13 21:58, 8F
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03/13 22:02, , 9F
NaCl 150mM....哪裡不對勁嗎??
03/13 22:02, 9F
推
03/13 23:28, , 10F
據我老闆說BCA可以tolerate detergent,應該沒問題才對
03/13 23:28, 10F
推
03/14 01:41, , 11F
我來說說除了試劑以外的原因 1.你的microplate不乾淨
03/14 01:41, 11F
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03/14 01:42, , 12F
2.讀值時 溶液有氣泡 不過我想 這些你應該都有注意到
03/14 01:42, 12F
推
03/17 18:43, , 13F
你的OD值有沒有弄錯阿??
03/17 18:43, 13F
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