[求救] 打細胞的方法?

看板Biotech作者 (a057687)時間16年前 (2008/01/31 11:34), 編輯推噓5(507)
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最近在養結膜的上皮細胞,我是用explant的方法,剛開始都長得很好,但一旦做passage 時就遇到大問題了,我用1mM EDTA 之 PBS先wash cell後再用 0.05%trypsin+1mM EDTA 來打細胞,結果不但很難打下來,而且打下來的細胞幾乎都死掉了,我查了書,發現很多 眼部的細胞都是用trypsin來打,濃度跟配方也都差不多,只是trypsin的時間都沒有明確的 記載,我已經失敗很多次了,想請問大家除了trypsin之外,是否可以只用collagenase來打 細胞,濃度跟時間到底要怎麼控制,因為我們實驗室現在有一瓶collagenase,因為一直 失敗,所以想換個方法試試看,請大家幫幫忙,感激不盡!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.117.33.128

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trypsin作用時間?
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我先作用5分鐘放在incubator內,發現大部分都下不來,又再作
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用了10分鐘後才打了8成下來
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我不知道跟細胞種類沒有關係.不過我都是在加Trypsin時不集中
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一處加.加了之後會搖一下讓他均勻.放進incubator一分鐘再打
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而且trypsin可以作用那麼久喔...我怎麼覺得我怎麼覺得是因為
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作用太久才死掉.不過我做的不是眼部細胞所以我不是很確定
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我trp都作用2-3min,因為我記得是最多10min後cell就開始死
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試試看用0.25%trypsin 30sec~1min
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用顯微鏡看比較準,每種細胞不太一樣,發現細胞開始有要
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浮起來以後,就用手拍拍 flask 應該很快就下來了!!
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把medium 洗乾淨點....多washr幾次 殘留fbs會降低打的
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文章代碼(AID): #17eK6jiy (Biotech)