[討論] Western blot電泳時的band很怪

看板Biotech作者 (la)時間18年前 (2008/01/27 16:11), 編輯推噓5(5推 0噓 6→)
留言11則, 3人參與, 最新討論串1/1
最近發現電泳時 每個band跑起來都是呈不連續狀 呈現有些顆粒狀 其時在sample denature後發現sample似乎就有些沉澱物 但還是把sample全load到well中 截果就出現這個情況 我確定不是膠有問題(well也有沖乾淨,marker跑起來也沒此現像) 我記的以前有老師說過 發現sample denature後有沉殿物 就要離心 最後只要load上清液 (ps.sample前處理是+lysis buffer離心後只取上清液 所以為何denature 會有沉澱物出現 也不清處 ,有懷疑過是SB buffer是否泡的不好) 所以想請教大家 電泳時會出現這個情況的原因 要如何改進? sb buffer是否會讓samlpe在denature出現沉澱物呢?謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.73.48.149
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01/27 17:42, , 1F
sample buffer加後煮過不是都要離心嗎?
01/27 17:42, 1F
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01/27 17:42, , 2F
原因不是你的buffer問題..而是本身就有一些東西會沉殿吧
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01/27 17:43, , 3F
不離心去跑都會這樣..光是load的感覺就差很多
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01/27 17:57, , 4F
sample buffer煮過都要離心 一直以來都沒有這一步
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01/27 17:58, , 5F
請問轉速跟時間各多少 謝謝(這是我第一次聽到的必作步驟)
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01/27 18:16, , 6F
我是用全速(約16k G)離心5min啦..我一開始學就被教一定要
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01/27 18:17, , 7F
做這一步說?..是很奇怪嗎?每次離後底部都有一些沉澱沒錯
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而且我也試過沒離心就用就真的會怪怪的..
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01/27 18:18, , 9F
不管是load的感覺跟跑的結果都有差
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01/27 19:52, , 10F
那定量後的CONTROL組 準嗎
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推
01/28 09:38, , 11F
你的sample buffer有沒有加SDS and DTT 有加會好一點
01/28 09:38, 11F
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