[求救] DNA isolation by Trizol

看板Biotech作者maoneko (mao)時間18年前 (2008/01/09 14:24)推噓10(10推 0噓 2→)

留言12則, 7人參與討論串1/1

我最近開始用trizol抽DNA ，之前完全沒有試過，按照別人給的protocol操作, 結果最後測OD時有一管為0，沒有DNA 一管為0.9mg/ml,但260/280=0.3, DNA濃度很低且不夠pure 請各位有經驗的人幫我看一下是出了啥問題？ ~~謝謝大家~~ 我的protocol如下 1. cell pellet + Trizol 1 ml, vortex 2. 55度C, 10 mins 3. add 200 ul Chloroform, vortex 4. 靜置5 mins 5. spin 1200 rpm, 15 mins, 4度C 6. 移除上清液, 取出中間層白色部份DNA 7. add 300 ul 100% ethanol, vortex, 靜置3 mins 8. spin 12000 rpm, 5 mins, 4度C 9. add 1 ml 0.1M Sodium Citrate in 10% ethanol 室溫上下翻轉30 mins 10. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C 11. 移除上清液，重複9.10步驟 12. add 1 ml 75% ethanol,室溫上下翻轉10 mins 13. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C, 移除上清液 14. air dry 5 mins 15. add 50 ul TE buffer, 65度C 30 mins, 加熱過程中vortex數次 16. 測OD -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.134.146

推

linlin711006

01/09 14:51, , 1^F

01/09 14:51, 1^F

推

grandia

01/09 15:23, , 2^F

01/09 15:23, 2^F

推

wea

01/09 16:02, , 3^F

01/09 16:02, 3^F