[求救] 關於自由基(DPPH)清除試驗

看板Biotech作者 (小次郎)時間18年前 (2008/01/02 11:45), 編輯推噓2(201)
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小弟現在在測試重組蛋白的抗氧化力 遵照侯文琪等人於2001年發表文章的方法 先取1.2ml 的sample + 0.1ml pH7.9 Tris 再加1.2ml 80 micro Molar DPPH (in methanol) 避光、靜置室溫40分鐘後測OD517nm 實驗結果 以glutathione當標準品的實驗基本上沒問題 吸光值隨glutathione的濃度增加而降低 但我的重組蛋白的測試卻發現吸光值會隨著濃度增加而增加(非線性) 可是以肉眼觀察 DPPH的顏色是有減少..甚至會接近黃色 顯示我的重組蛋白應該是具有DPPH清除能力 不懂的就是為什麼吸光值反而會上升? 不知道各位先進有沒有遇過類似的問題? 懇請各位的幫忙 小弟已延半年了 這個實驗做不出來還不知道要再延多久 T_T -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 134.208.24.96

01/02 12:21, , 1F
說不定是甲醇濃度太高 造成蛋白變性
01/02 12:21, 1F

01/02 12:23, , 2F
不如試試蛋白單獨加甲醇如何
01/02 12:23, 2F
有測試過 但沒有吸光值(只有0.001) ※ 編輯: transmore 來自: 134.208.24.96 (01/02 13:56)

01/02 14:51, , 3F
放個30分鐘試試看 我接觸的DPPH都靜置或混勻30min
01/02 14:51, 3F
文章代碼(AID): #17UmZ45r (Biotech)