請問萃取膜蛋白用的方法
有爬過文了,很多都是用超高速離心或是直接買kit
但是我想問的是,如果想要看protein translocation的話
是不是需要先把細胞打孔?(這樣後續離心才可以分出nucleus cytosol and membrane)
然後再用RIPA buffer把各個fraction lysis掉
於是我有找paper
有人是用polytron homogeniser(這什麼?我查叫均質機)做預處理然後去做超高速離心
但是實驗室並沒有那樣的設備,請問我可以用sunication的方式去把細胞膜打孔嗎?
我嘗試做過然後去染發現trypan是可以讓dye跑到細胞裡面
但是sonic的強度時間不好抓,我怕到時purified出來根本就不純
所以不知道用什麼方法比較好??
另外sucrose gradient查網站都沒有很明確的一個protocol
雖然有人說不好做但是我到是想嘗試看看
不知道有沒有不錯的教學網站呢??(我們實驗室目前沒人做這方面)
在此先向各位說聲謝謝^^
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