[求救] FLAG抗體

看板Biotech作者 (工作有夠忙)時間16年前 (2007/12/04 08:41), 編輯推噓4(405)
留言9則, 4人參與, 最新討論串1/1
我在做FLAG-tag的蛋白質實驗 實驗大致如下 實驗組:有個PROTEIN帶FLAG, whole cell lysate control組:一樣的細胞,不過沒有PROTEIN帶FLAG 先用FLAG affinity beads做IP wash過7遍後拿BEADS去煮 之後做western 用的抗體是Sigma M2 monoclone antibody 很鳥 染出來一堆bands 連negative control也一堆(有用affinity column先抓耶@@) 有在GOOGLE查到國外論壇也很多人碰到相同問題 http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/13665.html 有人碰到類似問題嗎?要怎麼解決?感恩 >< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.126.12.63

12/04 13:11, , 1F
sigma M2的Ig濃度太高,不小心使用很容易就會這樣
12/04 13:11, 1F

12/04 14:52, , 2F
你的flag beads上面的Ab是不是也是mouse的?!
12/04 14:52, 2F

12/04 14:53, , 3F
不曉得你的一堆band是不是heavy/light chain~
12/04 14:53, 3F

12/04 23:20, , 4F
flag beads上也是M2 abs, 老鼠的,我SAMPLE是人的細胞
12/04 23:20, 4F

12/04 23:21, , 5F
heavy/light chain會有一堆嗎@@ 不是只有兩條喔 ><?
12/04 23:21, 5F

12/05 21:46, , 6F
請於煮sample時於sample中加入1-1.5ul之1M DTT 可改善
12/05 21:46, 6F

12/05 21:47, , 7F
因為IP及WB 1抗 同一Species之Ab所造成之heavy/light chain
12/05 21:47, 7F

12/05 21:49, , 8F
可以試試看 很好用 但若要看的蛋白不能是25 or 50kD
12/05 21:49, 8F

12/10 22:05, , 9F
我實驗不能用DTT耶(Orz)
12/10 22:05, 9F
文章代碼(AID): #17LA97ZO (Biotech)