[求救] 新手抽蛋白

看板Biotech作者 (日子過的真快阿)時間18年前 (2007/10/14 14:48), 編輯推噓7(7推 0噓 2→)
留言9則, 7人參與, 最新討論串1/1
我養的是血癌細胞 小小圓圓的 就算養滿一個T75 離下來的細胞看起來也很少 因為細胞小 前幾天加adriamycin處理細胞 總共用了三盤約六七分滿的T75 之前學長使用的劑量是5ug/ml 我總夠加了200ug/ml 昨天分別依七個時間點收蛋白 並拿去定量 發現蛋白濃度很低... 只有未加藥處理的蛋白濃度超高 加藥處理的就算用五倍sample buffer 每個well也要load將近40ul的sample... 想請問一下: 是因為我的細胞在加藥處理後死了一大片嗎? 還是RIPA buffer與PMSF的問題 我只加80ul去打破細胞(量不會很少)? 還有其他方面的問題導致我收的蛋白濃度很低嗎? 想請問一下大家 有這方面的經驗嗎? 謝謝~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.92.78
推
10/14 16:32, , 1F
我在加RIPA的時候都會看離心下的細胞量 決定要加多少
10/14 16:32, 1F
→
10/14 16:33, , 2F
我有加到 50ul的時候 細胞打的破就好
10/14 16:33, 2F
推
10/14 18:39, , 3F
很顯然是加藥以後細胞死很大 不信 收細胞以前顯微鏡下看一看
10/14 18:39, 3F
推
10/14 22:44, , 4F
取一些些 染trypan blue看看 是否死的佔大多數
10/14 22:44, 4F
推
10/15 00:17, , 5F
你用0.2mg/ml不只細胞會死,買來的adr也只夠你玩幾次實驗吧
10/15 00:17, 5F
推
10/15 00:23, , 6F
不然就濃縮一下蛋白好了
10/15 00:23, 6F
推
10/17 13:14, , 7F
加到200有文獻依據嗎? 我之前看到paper只有加30ug/mL
10/17 13:14, 7F
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10/17 13:16, , 8F
就可以篩出 K562/ADM 和一般 K562 (假設你用的是K562)
10/17 13:16, 8F
推
10/17 20:11, , 9F
推樓上!
10/17 20:11, 9F
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