[求救] PCR和 TEMPLATE 量多少有關嗎?..

看板Biotech作者 (誰要陪我吃麻辣狀員)時間18年前 (2007/10/13 07:24), 編輯推噓7(7推 0噓 2→)
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看 說明書 是寫 50ul 要< 1ug 我要的是 20ul 取約 150-200ng TEMPLATE 跑 PCR 換過新的 酵素後 就一直沒跑出來... 用之前的酵素 可以有東西... 想一想 唯一影響的有可能就是 TEMPLATE 濃度 因為 ENZYME BUFFER DNTP 都是新的 難到是 PRIMER 有問題...??> -- 嗚呼！汝病吾不知時，汝歿吾不知日；生不能相養以共居，歿不得撫汝以盡哀；斂不憑其 棺，窆不臨其穴。吾行負神明，而使汝夭；不孝不慈，而不得與汝相養以生，相守以死。 一在天之涯，一在地之角，生而影不與吾形相依，死而魂不與吾夢相接。吾實為之，其又 何尤！彼蒼者天，曷其有極！自今已往，吾其無意於人世矣！當求數頃之田於伊潁之上， 以待餘年，教吾子與汝子，幸其成；長吾女與汝女，待其嫁，如此而已。 嗚呼！言有窮而情不可終，汝其知邪！其不知心也邪！嗚呼哀哉！尚饗。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.217.247.132
推
10/13 08:54, , 1F
template是質體? 如果是質體 我通常只用 1到3ng去跑
10/13 08:54, 1F
推
10/13 08:57, , 2F
primer是 0.5到1mM
10/13 08:57, 2F
推
10/13 11:14, , 3F
template量不用給的這麼多
10/13 11:14, 3F
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10/13 11:16, , 4F
我的template如果是質體 25ul放10-20 ng...也是放太多XD
10/13 11:16, 4F
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10/13 11:18, , 5F
為什麼換了酵素出不來 會覺得是template濃度的問題?
10/13 11:18, 5F
推
10/13 13:15, , 6F
換了酵素後,最大的問題絕對是溫度,慢慢try吧
10/13 13:15, 6F
推
10/13 17:03, , 7F
做個gradient試試
10/13 17:03, 7F
推
10/14 00:25, , 8F
提供一下酵素由哪個換到哪個..可能是敏感度改變.cycle要放大
10/14 00:25, 8F
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10/14 00:29, , 9F
還有buffer跟酵素是一套一起來的嗎...混用會有很多問題...
10/14 00:29, 9F
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