[求救]primer二級結構太強??
第一次設計
發現產物的定序結果沒有forward primer的序列
因此也不是我要的片段(雜band)
設計第二次的primer加酵素切位共30 mer
因為序列關係所以沒有辦法再移動primer的位置
只能增減base數
我也知道設計出的primer二級結構會很緊密
有什麼方法減少這部份對PCR的影響??
(我有試過GC buffer,效果不大)
눊
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