[問題] 關於蛋白質定量法?!

看板Biotech作者 (我會好好加油^^)時間17年前 (2007/07/11 21:11), 編輯推噓11(11012)
留言23則, 3人參與, 最新討論串1/1
恩 我想請問一下 做蛋白質定量的時候 使用 Bradford method 其中 Dye 的多寡會影響到OD值嗎? 其實是我有同學最近在做這個 實驗方法是 10ul的BSA + 190ul 的Dye 然後同時做兩組 操作的順序如下: 濃度1.0(mg/ml) 的BSA 第一組加完 後加第二組 濃度0.8(mg/ml) 的BSA 第一組加完 後加第二組 . . . . 然後八個濃度兩組都加完後 使用八爪 (這個酷,我還沒用過@@) 一整組一起加入 Dye 然後跑完OD值後很神奇的.... 第一組一整組的數值都偏高 @@ (八個數值都比第二組高) 可是很奇怪耶 兩組的BSA是來自同一次稀釋的.... 她問我為什麼會這樣的時候,我也覺得很神奇 因為我覺得OD值不是應該和蛋白質濃度比較有關係嗎?? 或者純粹巧合? (也太巧了...Otz) 其實拉哩拉雜打這麼多字...只是想請問 OD值和Dye的多寡有沒有關係? 如果有它的原理是什麼呢?? 謝謝大家看完我的問題 Otz -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.170.2.190 ※ 編輯: linwei 來自: 218.170.2.190 (07/11 21:12)

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你的dye不是都加一樣的量嗎 那就沒關係吧
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雖然有點看不太懂~但第一組OD普遍比第二組高 可能操作
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速度不夠快 讓兩排反應時間差太多而造成
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嗯嗯 對後 沒想到反應時間...
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那..Dye的多寡會影響嗎?(即使只差5ul這麼微量..)如果會它原
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裡是什麼呢?? 謝謝你的回答 <(_ _)>
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※ 編輯: linwei 來自: 218.170.2.114 (07/12 15:49)

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我覺得應該不會吧 主要和蛋白質量有關係~但是若過量
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本身的紅棕色是否會影響就不清楚了! 最簡單的方法就是
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自己作測試= =" 其實買來的kit應該都會寫要加多少dye
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一般人都會乖乖照protocol,如果真的好奇就test一下吧
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光看你的文就覺得你對濃度跟量很沒有sense...
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Dye沒有濃度(一般會稀釋), 1000ul蛋白不是濃度
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呵 多謝樓上的指教 我錯了^^" ꨠ
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然後我也清楚Dye買回來都會稀釋..這樣又讓我多一問題了@@
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不同濃度的Dye (就是稀釋濃度不一樣) 下去做兩組對照後...
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這兩組的吸光值會一樣嗎??(前提是兩組的BSA都相同的濃度喔
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且加的Dye量也相同喲@@ )
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※ 編輯: linwei 來自: 140.128.68.249 (07/12 20:40)

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當然不會一樣囉~ 任何測定都有適合的範圍,可以自己試試呀
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前提是檢量線的做法也要一樣,且要用同一批稀釋的dye
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測定的時間也要相同,太久的話蛋白會開始變性沉澱
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另外,不要太相信八爪,除非你對自己用pipetman很有自信
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感謝您的回答 :D 有機會希望可以自己試試..(怕有時實驗室
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器材很貴不敢亂試 Otz..)
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文章代碼(AID): #16bDSK2k (Biotech)