[問題] 酒精沉澱後DNA量減少...救命呀

看板Biotech作者 (人生是一連串的選擇)時間17年前 (2007/07/06 02:08), 編輯推噓9(9推 0噓 17→)
留言26則, 5人參與, 最新討論串1/1
作phenol/chloroform酒精沉澱之後 原本在電泳膠上看到約200ng per microliter的DNA 銳減為不到50ng per microliter 爬文過，也google過 但還是不明白原因 另外，在每條land都會有...DNA跑過的痕跡 也就是會有拖band的情形 可請問各位高手 有哪些點要注意呢? 我的步驟是: 把DNA體積加到200 microliter 加等體積的phenol/chloroform vortex數秒 離心13K 5min 吸取上清液(到上清液變成一個完整的泡泡再吸一點...) 加入1/10體積的 3M NaOAc,1 ml冰的99.9%酒精 -80度冰箱冰o/n 4度離心13K 20min 倒去上清液 加常溫70%EtOH 0.5 ml 4度離心13K 5 min 倒去上清液 vaccum dry 10 min ddH2O回溶 多謝! (DNA一直被酒精沉澱沒收的可憐人) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.64.145.212 ※ 編輯: ppppai 來自: 61.64.145.212 (07/06 02:10) ※ 編輯: ppppai 來自: 61.64.145.212 (07/06 02:12)
推
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1. DNA的size??
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2. 加入一些2價金屬離子或許會有幫助
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3. 你酒精沈澱的配方怪怪的, 記得Molecular Cloning 好像
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不是這樣建議的
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（補充第一點）DNA size太小就不適用一般的酒精沈澱配方
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07/06 03:59, , 6F
我小時候有沈澱過50 bp 的DNA, and collagen works for it
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推
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Hmm..不是collagen,是glycogen,我之前有加,會增加一些產量
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我買的是Roche的glycogen,貴一點,但是超好用的...
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有的protocol說可以加20% sucrose來增加產量,我沒試過
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若是經濟上不允許,也許值得試一試
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推
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嗯是glycogen沒錯,前文有誤 多謝更正(的確是小時候做的..)
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推
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會不會是蛋白質沒弄乾淨DNA就跟著一起沉下去了
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推
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酒精沉澱的配方是甚麼？
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DNA一個13kb另一個8kb，RE切完產物為3kb，應該不小吧^^
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推
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說實話,那種DNA size算是非常容易沈澱的
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推
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去查一下Molecular Cloning 吧...
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另外有遇過是抽genomic DNA 用酒精沈澱作不好的確是因為
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nuclear protein太多而在pheno/chrol 萃取蛋白質的時候而
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lose太多DNA的情況；這種情況只要用力如proteinase K 先把
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proteins吃乾淨，萃取的時候第一次用純phenol，第二次再用
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phenol/chlo 這樣就可以得到很乾淨的純化DNA
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（不過看起來genomic DNA 似乎不是你的case）
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推
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嗯...我的DNA是用promega抽的kitDNA應該不會有protein太多
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的問題...我真的不知道是為什麼了...有沒有一些小撇布是我
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沒注意卻一定要很小心的???
07/08 01:30, 25F
推
04/11 17:51, , 26F
vortex數秒之後 你的DNA不會斷光光嗎?
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