[問題] 請問有沒有使用益生的酵母菌表現系統?
我現在在使用這個系統
我使用的載體是pYLSC1
他是一個外泌型載體
我先將我已經在E.coli表現過的基因片斷與載體接合之後
先在E.coli中放大載體的量(這個載體在酵母菌中不會複製)
再使用NotI切一刀 用kit送進酵母菌中
理論上會進行crossing over
再以缺乏Leu的plate來篩
我現在面臨的問題是因為它是外泌型載體
蛋白質大部分是分泌在細胞液中
因此在小量表現的部份比較難比較難挑選(外泌的量通常較少?)
另外我們當初為了方便回收有設計一個His tag 在C端
因此在大量表現結束 使用Ni-NTA或 Co-NTA回收
但是卻發現一個情況 培養液中似乎有一種物質會將 Ni 離子和 Co離子切掉
(通完washing buffer後 樹脂變為白色)
因此就使用硫酸銨沉澱來收蛋白質
請問各位大大有什麼建議或經驗嗎???
謝謝
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◆ From: 163.23.34.214
推
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