[問題] 有關ER上面的membrane protein

看板Biotech作者 (冏)時間17年前 (2007/05/23 16:44), 編輯推噓3(3推 0噓 3→)
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我目前手上有一個基因 [構築在pEF6/V5] 是在ER上面類似translocon的protein 建立stable clone後，卻沒辦法利用 V5 antibody辨識到 1.我確定它的確有in-frame 2.加bla篩了兩個多月了，挑了72個clone，一個都沒有 冏 後來想到，會不會是membrane protein的關係 我們是whole cell直接加入RIPA,4度作用30分 看paper，其他人是sonication後，高速離心分出membrane protein [但這可能是purify用的] 總而言之，有沒有哪位可以跟我說一下可能出現的問題 另外，有沒有做ER方面的人可以討論一下 大感激!!!!!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.177
推
05/23 19:11, , 1F
transfection後兩天就可用WB確認了 有的話再挑clones
05/23 19:11, 1F
推
05/23 19:31, , 2F
其實我有用transient確認過
05/23 19:31, 2F
→
05/23 19:32, , 3F
第一次有被V5辨識到，才挑stable clone
05/23 19:32, 3F
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05/23 19:32, , 4F
後來挑了stable clone後，就沒辦法被V5給認到了 [哭]
05/23 19:32, 4F
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05/23 19:33, , 5F
後來在進行一次transient的實驗，那條band就離我而去了
05/23 19:33, 5F
推
05/23 19:59, , 6F
CMV promoter容易被inactivated 不過問題好像是根本沒表現
05/23 19:59, 6F
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