[問題] Inverse PCR (iPCR)
第一次在這裡發問
如果不妥之處 請多指教
我最近在找一段基因的sequence
一開始先用其他物種相同基因conserved domain的sequence設計出degerate primer
用這個degenerate primer可以夾出一段跟conserved domain相似的片段
之後再利用這個片段的序列來設計iPCR的primer往外擴增
我一開始是用RT的方式得到cDNA
為了要把cDNA的頭尾相接成一個circular form的plasmid
就用restriction enzyme digestion cDNA
再把頭尾ligation起來
因為cDNA是single strand 所以是不是要先合成double strand的cDNA之後
再用restriction enzyme來進行digestion
那double strand的cDNA要怎麼合成呢？
是用random primer進行一般的PCR嗎？
Thanks!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.89
※ 編輯: Porkcan 來自: 140.115.48.89 (03/11 23:35)
※ 編輯: Porkcan 來自: 140.115.48.89 (03/11 23:45)