[請問] double restriction enzyme digest

看板Biotech作者時間18年前 (2006/07/25 16:38), 編輯推噓2(2推 0噓 1→)
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我是小小實習生 欲想將 PBI121(13Kb) 用BamH1和Sac1切兩刀(應該會得到12Kb和約2Kb的GUS片段) 但是一連切了不下十次... 得到的結果都是明顯可見2K的GUS片段，但是我要的12KbVector呈現短短的smear smear現象肉眼判斷是從原本的13Kb到我要的12Kb停止 是否 1.其中之一酵素失活(但又可以看到GUS片段??) 2.plamid問題，是否純化過程中殘留過多的RNA或雜質影響 3.condition: H2O 6 10XBSA 2 buffer1 2 (BamH175% Sac1100%) DNA 8 enzyme BamH1 1 Sac1 1 (ul) 37度 water bath 3 hours 請達人們幫我看看哪裡出了問題 感恩 -- ╭─ Origin ─╗ 新綠園 bbs.sa.ncyu.edu.tw ～ κλμ ─┤ ├ Author ╡ 220-143-214-84.dynamic.hinet.net
推
07/26 00:31, , 1F
這可能要看圖才知道 我印象中BamH1和Sac1是不推薦一起切的
07/26 00:31, 1F
→
07/26 00:33, , 2F
smear的現象是否是因為DNA量太多造成拖尾巴的現象
07/26 00:33, 2F
推
07/26 00:36, , 3F
NEB buffer中 BamH1和Sac1是推薦分開切效率較好
07/26 00:36, 3F
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