Re: [問題] 有關螢光顯微鏡??
※ 引述《crazyplayer (我可以給你勇氣!!)》之銘言：
: 我們老師要叫我做螢光顯微鏡(並非confocal)
: 可是 我的細胞不是attached的..所以 根本不可能貼在蓋玻片上 = ="這是困難點之一..
: 但我們老師說 蓋玻片 蓋上去 細胞就動不了了 ...這...???可否大家給我點指示??
把你的玻片先沾點0.2% genatin即可
我們lab養的K562都是這麼貼的
聽說poly-lycine也可以...
: 但好像有種叫作cytospin的方法 可以使susppension的細胞打在載玻片上...對吧!??
: 可是 要打多少細胞上去呢?是200個嗎??
: 但 現在我又有個問題..就是 我到底是要用什麼溶液去固定細胞呢?
: 是要用acetone-ethanol (1:1)呢?還是用 100%的純酒精??
fix....我都用2% formadehyde
你說的是permeabilize嗎?
: 還是要用2%的parafarmaldehyde..??
: 2.固定完細胞後 需要blocking嗎???我會覺的有問題的原因是confocal不用blocking!
:
完全比照wstern blot
3.因為 我要看的蛋白是alpha-tubulin.和beta-tubulin..用是 FITC去看...
: 再加藥之後 是否這兩種蛋白有否增加or.減少???
: 我的問題是 ....看這兩種蛋白一定要活細胞 or 死細胞嗎??(因為我考慮到hy抗體的時
: 間，因為如果是活細胞的話 就不用hy太久 如果是死細胞的話就可能hy很久...
: 4.因為FITC很容易decay也...hy 完一抗和二抗後...是封片完..想看再看嗎??
:
是阿
如果是..那這樣FITC 會不會decay呀/??是不是一定要在暗房做呀??
避光即可
: 5.最後 大家有染細胞核 來確定 細胞數的多少嗎?/就是所謂的mounting.??
有染DAPI
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