[問題] 困惑的考古題

看板Biology作者 (凱凱)時間14年前 (2010/03/09 22:51), 編輯推噓3(3推 0噓 17→)
留言20則, 6人參與, 最新討論串1/1
【問題】： Cloning DNA 片段約2KB至pUC18 中，養在抗生素的plate中。 利用X-gal 篩選，得到藍白各一個菌落。 但是 在藍色菌落中的切割位只有發現約45 bp的片段 ， 而白色菌落中更是完全沒有外來 的片段！請解釋原因!!! 附上原題目：http://ppt.cc/uk-c 第四題 【問題起因】： 中興大學98年生技所考古題....小弟是考生 【個人看法】： 小弟知道藍色＝beta-galactosidase水解X-gal ， DNA片段未插入。 白色＝DNA片段插入 ， 破壞了 Lac Z 。 但是題目....真的沒概念。請大大們幫忙解答。 感激不盡！！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.62.183.98
推
03/10 01:14, , 1F
有可能是RE使用不當吧?
03/10 01:14, 1F
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03/10 09:06, , 2F
限制脢使用不當嗎？可以幫忙解釋一下嗎？拜託了
03/10 09:06, 2F
推
03/10 12:14, , 3F
題目完整敘述是啥..?
03/10 12:14, 3F
※ 編輯: zphiroude 來自: 61.62.183.98 (03/10 12:51)
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03/10 16:33, , 4F
建議應該回答可能的原因.然後可以用甚麼方法來確認..
03/10 16:33, 4F
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03/10 17:56, , 5F
小弟就是不知道可能的原因，拜求大大幫忙 Orz
03/10 17:56, 5F
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03/10 18:43, , 6F
primer互黏變成45bp,codon無影響? vector互黏變白colony?
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03/10 18:45, , 7F
假設是用兩個切位送進去的話 pUC18不大 insert有2kb
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03/10 22:11, , 8F
兩個ori的plasmid不會replication
03/10 22:11, 8F
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03/10 22:12, , 9F
藍色大概就真的接進primer dimer 不過有切膠也不會這
03/10 22:12, 9F
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03/10 22:13, , 10F
蠢吧...白色沒target insert大概是塞入別段DNA
03/10 22:13, 10F
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03/10 22:13, , 11F
不對 題目是一丁點都沒有...
03/10 22:13, 11F
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03/11 09:01, , 12F
primer ? transformation 沒用到primer吧＠＠
03/11 09:01, 12F
推
03/11 09:23, , 13F
1)RE有star activity 無insert 但多切破壞LacZ 2)此載體
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03/11 09:25, , 14F
未被多切 且插入的45bp片段未影響LacZ的ORF 所以仍呈藍色
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03/11 09:25, , 15F
1)是指白色的菌落 2)是指藍色的菌落
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03/11 10:12, , 16F
感謝樓上大大指點，但插入的45bp未影響lac Z的ORF，
03/11 10:12, 16F
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03/11 10:13, , 17F
但pUC18 的切位應該是設計在ORF中，怎會無影響？？
03/11 10:13, 17F
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03/11 10:59, , 18F
接得好就變成雖外加15個胺基酸(=45bp) 但未影響酵素活性區
03/11 10:59, 18F
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03/11 11:02, , 19F
（因未改變LacZ大部分的ORF序列）
03/11 11:02, 19F
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03/11 11:21, , 20F
瞭解了，這樣就合理了。感謝senlin大大指導
03/11 11:21, 20F
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