[問題] 請教抽total RNA的問題

看板Biology作者 (酷嗜野味三十娘)時間15年前 (2008/09/29 02:24), 編輯推噓5(5推 0噓 8→)
留言13則, 5人參與, 最新討論串1/1
【問題】： 這幾次抽RNA後，跑RNA電泳，出來的結果都有數條band，雜訊也很多，拿給學姊看後， 學姊說我的RNA都degrade掉了… 我試了好幾次都有同樣問題，不知道是否有高手能指點我忽略了哪些細節，非常感恩orz 我的樣本為斑馬魚，採樣後浸泡於RNA later裡面，4度C overnight後轉到-20度、-80度 實驗開始會先以RNAase away噴灑環境，也都有戴手套；實驗試劑均用DEPC配置；抽完RNA 測OD260/280比值都在1.8～2.0之間。 protocol：樣品在冰上解凍後加入Trizol研磨均質數秒，加入chloroform、離心後加入 isopropanol、離心後用75% EtOH 洗後待乾，加入50ul的DEPC水。 （中間細節未述，我明天去實驗室補足資料。） -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.160.142
推
09/29 02:45, , 1F
可能的話不要用RNA later再結凍解凍，直接用Trizol。
09/29 02:45, 1F
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09/29 09:36, , 2F
n大的意思是直接用trizol保存要抽的樣本嗎？@@
09/29 09:36, 2F
推
09/29 11:53, , 3F
為什麼這抽RNA會用到chloroform 和 isopropanol
09/29 11:53, 3F
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09/29 11:53, , 4F
這不是用在抽DNA嗎??
09/29 11:53, 4F
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09/29 13:03, , 5F
我用chloroform使樣品分層、再用isopropanol使RNA沉澱喔@@"
09/29 13:03, 5F
推
09/29 13:22, , 6F
那我想順便問個問題 我抽RNA 忘記加chloroform 直接加
09/29 13:22, 6F
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09/29 13:22, , 7F
ISOPROPANAL 那~還有補救的方法嗎？
09/29 13:22, 7F
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09/29 17:40, , 8F
我之前也忘記過…當時的處理方式好像是重新加chloroform
09/29 17:40, 8F
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09/29 17:41, , 9F
離心後看分層情況，如果有分層，再取上層加isopropanol
09/29 17:41, 9F
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09/29 17:42, , 10F
不過不保證成功喔，我記得那次抽出來的RNA Ratio不是很好@@"
09/29 17:42, 10F
推
09/29 22:45, , 11F
我的意思是直接抽新鮮的作實驗，不要放。
09/29 22:45, 11F
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09/30 00:15, , 12F
喔喔我會錯意了XDb 感謝n大！
09/30 00:15, 12F
推
10/25 21:05, , 13F
DNA如果可以盡量不要放 還有我覺得RNA LATER不好用...
10/25 21:05, 13F
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