[問題] 有關Genomic DNA PCR的問題
我目前要從genomic DNA當中利用PCR的方式擷取我的target sequence
之後要做construct測試其promoter activity
target sequence size 約 3.3KB 為一段promoter sequence
基於大小與正確性 預計使用pfu enzyme
想請問利用primer去夾這種genomic DNA
其primer design上有沒有特別需要注意的地方
我與老師討論過 他認為Tm值範圍應介於60~65之間
其專一性才會夠高(因為是自細胞抽的DNA去進行擷取)
但是這麼高 做的出來嗎?
我以前做昆蟲的genomic DNA PCR 57度就沒有問題了
不知道板上各位先進的看法如何?
還有就是想請問這類的實驗有沒有特別需要注意的地方呢?
小弟在此先謝過了
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